優(you)良的(de)穩定性、靈敏(min)度(du)、精確度(du)及制造過程中的(de)可重復性，使得膠(jiao)體金適合(he)基于膜的(de)檢(jian)測技術(shu)。

快速膜檢測需求(qiu)廣(guang)泛，可應(ying)用于諸多領域（見(jian)下(xia)表）。隨著靈敏度和特異性的(de)提升(sheng)，大量的(de)潛在應(ying)用可能是作為(wei)替代(dai)昂貴儀器檢測方(fang)法的(de)低成本選(xuan)擇。

快速檢(jian)測(ce)的應用

臨床醫用 ??變態反應 ??心梗標志物 ??退行性病變 ??藥物濫用 ??生殖 ??法醫 ??免疫分型 ??感染性疾病 ??血清學試驗 ??性傳播疾病

應激反應 ??毒理學 ??腫瘤標記 農業應用 ??食品安全 ??植物及農作物疾病 環境應用 ??生物學污染 環境污染獸醫學應用 （與多數人類臨床應用領域相似)

這篇文章重點講述此種檢測方法中極為重要的組成部分—檢測標記物的生產制造對整個檢測系統的性能及可靠性的影響；尤其是強調了膠體金標記物在此檢測功能中的優勢。

什么是快速檢測(ce)？

快速(su)檢(jian)測(ce)是一(yi)種廉價的、一(yi)次性的、 基于(yu)膜的檢(jian)測(ce)方法，它能提供分析物存在于(yu)液體(ti)樣品的視覺(jue)證據。這種檢(jian)測(ce)可以以獨立(li)的試紙條，也可以以裝(zhuang)在塑(su)料盒中的形式(shi)進(jin)行(xing)。總的來說，做此(ci)項檢(jian)測(ce)至少(shao)只 需(xu)200ul的液體(ti)標本，可在2至5分鐘內完成。在臨床(chuang)檢(jian)測(ce)中，樣品可能有尿、血(xue)液、血(xue)清、唾(tuo)液或(huo)其他體(ti)液。

在非臨(lin)床檢(jian)測中，樣本可(ke)能(neng)是由土壤(rang)、粉塵、植(zhi)物或(huo)者(zhe)食品制備的(de)微量溶液(ye)，它們同樣可(ke)以直接應用(yong)膜試紙條(tiao)檢(jian)測。這種檢(jian)測方法無需儀器操作，可(ke)應用(yong)于臨(lin)床、實驗室(shi)、室(shi)外或(huo)者(zhe)家庭——通常為無操作經驗人員使用(yong)。

快速檢測法有兩種形式——層析和滲濾。層析是最普通的形式因為其制造及使用都比較簡易，這兩種形式所涉及的原理雖然相同，但我們這里將要討論的是層析檢測法。
一(yi)個快(kuai)速(su)檢測(ce)(ce)的底層一(yi)般是硝酸纖(xian)維素(su)膜，在它上面(mian)固定了檢測(ce)(ce)蛋白，通常是抗體或抗原（圖1）。

圖1 側(ce)向層析快速檢測(ce)試(shi)紙(zhi)條的結構圖

連接(jie)著膜的(de)(de)(de)是包含有干(gan)燥金標的(de)(de)(de)金標墊(dian)（通(tong)常是玻(bo)璃??? 纖(xian)維）。對(dui)于目(mu)前(qian)大多數可(ke)做(zuo)的(de)(de)(de)檢測項目(mu)，這種(zhong)結合(he)墊(dian)含有吸附了針對(dui)待檢分(fen)析(xi)(xi)品(pin)的(de)(de)(de)特異(yi)性抗體或抗原(yuan)的(de)(de)(de)金粒子。樣品(pin)墊(dian)通(tong)常為紙質(zhi)，附著著結合(he)墊(dian)。當使(shi)用(yong)樣品(pin)墊(dian) 時，液(ye)體樣品(pin)通(tong)過毛 細擴散作(zuo)用(yong)穿移過結合(he)墊(dian)，再水化金交(jiao)聯(lian)物(wu)(wu)，使(shi)待分(fen)析(xi)(xi)樣品(pin)與(yu)交(jiao)聯(lian)物(wu)(wu)相(xiang)互作(zuo)用(yong)。然后金交(jiao)聯(lian)物(wu)(wu)與(yu)待分(fen)析(xi)(xi)樣品(pin)復(fu)合(he)物(wu)(wu)轉移至(zhi)膜條(tiao)帶上再移向蛋白結合(he)物(wu)(wu)，復(fu)合(he)物(wu)(wu)在(zai)此(ci)處 被固定(ding)后以一(yi)條(tiao)細細的(de)(de)(de)紅線(xian)的(de)(de)(de)形(xing)式(shi)產(chan)生明顯的(de)(de)(de)信號。第二條(tiao)線(xian)是控制(zhi)線(xian)，由余(yu)下的(de)(de)(de)金交(jiao)聯(lian)物(wu)(wu)形(xing)成(cheng)于膜上，表明測試完(wan)成(cheng)。

顧(gu)名思義，快速檢(jian)測(ce)應(ying)在短時間內提供結果(guo)，準確的(de)(de)說(shuo)是(shi)(shi)在幾分(fen)鐘(zhong)內。這(zhe)種檢(jian)測(ce)法必須方便(bian)、精確、可靠、廉價、是(shi)(shi)一(yi)次 性的(de)(de)而且(qie)操作簡易的(de)(de)。它們也必須容(rong)易和(he)清楚的(de)(de)說(shuo)明書，甚(shen)至(zhi)是(shi)(shi)沒有經驗的(de)(de)使用(yong)(yong)者也能操作。從生產廠家(jia)的(de)(de)觀點來(lai)看，這(zhe)種快速檢(jian)測(ce)將會帶(dai)來(lai)巨(ju)大的(de)(de)附(fu)加值(zhi)，且(qie)容(rong)易 向世(shi)界各地(di)的(de)(de)使用(yong)(yong)者推廣，而無(wu)論使用(yong)(yong)者其有無(wu)此項(xiang)檢(jian)測(ce)的(de)(de)經驗（見文后(hou)附(fu)言）。

快速檢測功能(neng)廣泛。改(gai)變(bian)抗體或者對(dui)條(tiao)帶的化(hua)學(xue)配(pei)方(fang)作微小(xiao)的變(bian)動(dong)，同(tong)樣的設(she)計應能(neng)用于多種(zhong)檢測。

為(wei)何使用金標記(ji)？

早(zao)期(qi)的(de)(de)(de)快(kuai)速檢(jian)測(ce)使用有色膠(jiao)乳(ru)形成可視信號，目前(qian)的(de)(de)(de)某些檢(jian)測(ce)仍(reng)使用此手段。 過去和(he)現(xian)在，乳(ru)膠(jiao)法(fa)一直是凝(ning)集反(fan)應主(zhu)要的(de)(de)(de)標記方法(fa)，這是因為它(ta)在結合成分的(de)(de)(de)存在下易(yi)于(yu)凝(ning)集。對(dui)于(yu)快(kuai)速檢(jian)測(ce)而(er)言，交聯(lian)物的(de)(de)(de)穩定性是避免假陽性的(de)(de)(de)關鍵，而(er)易(yi)于(yu)凝(ning)集可能就是其產生假陽性的(de)(de)(de)主(zhu)要問題。

因(yin)為(wei)具(ju)有更好的潛在(zai)(zai)穩(wen)(wen)定(ding)(ding)(ding)性(xing)(xing)，20世紀80年代末，金標記(ji)被(bei)(bei)引入(ru)膜快(kuai)速檢測(ce)中。在(zai)(zai)適當(dang)的生(sheng)產條(tiao)件下，任(ren)何(he)被(bei)(bei)精確大(da)小的金顆粒(li)都(dou)可(ke)(ke)(ke)以被(bei)(bei)重(zhong)現性(xing)(xing)制造出來。 不同的大(da)小可(ke)(ke)(ke)用(yong)(yong)于(yu)不同的用(yong)(yong)途。其(qi)優良的穩(wen)(wen)定(ding)(ding)(ding)性(xing)(xing)、敏感性(xing)(xing)、精確性(xing)(xing)及可(ke)(ke)(ke)重(zhong)復生(sheng)產性(xing)(xing)等特(te)點使得(de)金適合于(yu)在(zai)(zai)快(kuai)速檢測(ce)中的應用(yong)(yong)。金本(ben)性(xing)(xing)屬(shu)惰(duo)性(xing)(xing)元素，被(bei)(bei)適當(dang)加工可(ke)(ke)(ke)形成 完整的球形顆粒(li)。當(dang)正確連接(jie)時，蛋(dan)白質能牢固地結合在(zai)(zai)金顆粒(li)表(biao)面，無論是液態或固態都(dou)能保持長久的穩(wen)(wen)定(ding)(ding)(ding)性(xing)(xing)。而且，若(ruo)是在(zai)(zai)制造過(guo)程中蛋(dan)白被(bei)(bei)精確固定(ding)(ding)(ding)，其(qi)與金 交聯物的非特(te)異性(xing)(xing)結合可(ke)(ke)(ke)被(bei)(bei)減至零。

標記抗(kang)(kang)體(ti)和抗(kang)(kang)原的(de)不同標記物優缺點的(de)比較如表1所示：

表(biao)1.快速檢(jian)測(ce)中常用標(biao)記(ji)物的特征比較

特征	金	銀	碳	乳膠	燃料	酶
重復性	***	*	***	***	***	***
放大性	***	*	**	**	**	***
一步	***	***	**	**	**	*
敏感性	*	—	*	***	***	**
多重分析檢測	***	***	*	*	*	**
穩定性	***	***	**	*	*	*
結果清晰	***	***	***	***	***	—
易于制備	***	***	**	**	**	**
使用簡單	***	***	*	**	*	*
適應性	**	**	**	**	**	***
低成本	***	***	***	***	***	**
* 應用受限
**適于部分檢測
***效果顯著適于大部分檢測

膠體金的(de)制造

當膠體金被大量(liang)生(sheng)產時，為(wei)保證批(pi)間重復(fu)性(xing)及(ji)避免不穩(wen)定性(xing)，成熟的工藝方法是必須的。為(wei)獲得最終穩(wen)定敏感的產品，生(sheng)產100升高質量(liang)的膠體金就需要(yao)極度的細(xi)心與仔細(xi)以獲得最終穩(wen)定及(ji)高靈敏度的產品。在生(sheng)產過程中的每一步都需要(yao)使(shi)用電(dian)鏡(jing)檢查來進行質量(liang)控制。

圖２　金離(li)子還原(yuan)形成金顆粒

在過去的(de)20年(nian)里，生(sheng)產商(shang)們引(yin)進了各種不同的(de)方法(fa)來合成膠體金(jin)(jin)，目(mu)的(de)就是為了獲得直(zhi)徑(jing)一定(ding)且均一的(de)單分散性的(de)膠體。盡管(guan)所有(you)(you)的(de)生(sheng)產方法(fa)都是依賴于(yu)還 原HAuCl4來形成金(jin)(jin)原子，但其物理條件(jian)還是有(you)(you)相當大(da)的(de)差異，如反應物添(tian)加的(de)次序、還原劑使(shi)用的(de)多(duo)寡、以及最終生(sheng)產出的(de)膠體的(de)質(zhi)量（大(da)小、形狀(zhuang)、變異系(xi) 數等）。

大體來(lai)說，所有的生(sheng)產方法都是(shi)使用還原劑提供電(dian)子(zi)給溶液中帶正電(dian)荷的金離子(zi)而產生(sheng)金原子(zi)，如下所示(shi)：

氯金酸(suan)＋還原劑＝膠體金

HAuCl4 + e– = Au0

通常使(shi)用的還(huan)(huan)原劑(ji)包括檸檬酸鈉、黃磷、硼氫化鈉、硫氰酸鈉。圖２所(suo)示為不同離子水(shui)平還(huan)(huan)原過程。

在加(jia)入還(huan)原(yuan)劑(ji)之(zhi)(zhi)前，溶液(ye)(ye)(ye)中(zhong)所含為(wei)(wei)100%金(jin)(jin)離子(zi)。曲線的(de)(de)縱坐標代(dai)表在加(jia)入還(huan)原(yuan)劑(ji)時金(jin)(jin)離子(zi)轉變為(wei)(wei)金(jin)(jin)原(yuan)子(zi)的(de)(de)進程。加(jia)入還(huan)原(yuan)劑(ji)之(zhi)(zhi)后，溶液(ye)(ye)(ye)中(zhong)金(jin)(jin)原(yuan)子(zi)的(de)(de)含量立 即(ji)出現(xian)急劇的(de)(de)上(shang)升(sheng)，直(zhi)到(dao)其(qi)達到(dao)過飽和。緊接著在一個被稱作核(he)(he)化的(de)(de)過程中(zhong)發生凝(ning)集作用(yong)，在核(he)(he)化位(wei)點(dian)形成由11個金(jin)(jin)原(yuan)子(zi)構成的(de)(de)中(zhong)央(yang)的(de)(de)二十(shi)面體金(jin)(jin)核(he)(he)心(xin)。核(he)(he)化位(wei)點(dian) 的(de)(de)形成是為(wei)(wei)了(le)減少(shao)溶液(ye)(ye)(ye)中(zhong)金(jin)(jin)原(yuan)子(zi)的(de)(de)過度飽和，其(qi)形成極(ji)其(qi)迅速。此過程一旦(dan)完成，溶液(ye)(ye)(ye)中(zhong)剩余的(de)(de)金(jin)(jin)原(yuan)子(zi)在遞減的(de)(de)能量梯度下繼(ji)續結合核(he)(he)化位(wei)點(dian)直(zhi)到(dao)所有的(de)(de)原(yuan)子(zi)從(cong)溶液(ye)(ye)(ye) 中(zhong)移除。

最(zui)(zui)(zui)初形(xing)(xing)(xing)成(cheng)的(de)(de)(de)(de)核(he)數(shu)(shu)(shu)目(mu)(mu)(mu)決定了最(zui)(zui)(zui)終將有(you)多少顆粒(li)(li)(li)形(xing)(xing)(xing)成(cheng)于(yu)溶液(ye)中，而(er)這(zhe)個數(shu)(shu)(shu)目(mu)(mu)(mu)又反過(guo)來取決于(yu)所(suo)(suo)加(jia)入(ru)(ru)的(de)(de)(de)(de)還(huan)原(yuan)劑的(de)(de)(de)(de)量。還(huan)原(yuan)劑越多產(chan)生(sheng)(sheng)的(de)(de)(de)(de)晶核(he)越多從(cong)而(er)產(chan)生(sheng)(sheng)的(de)(de)(de)(de)金(jin)(jin)顆粒(li)(li)(li)也 越多。顯而(er)易見，在一(yi)(yi)(yi)(yi)個含既(ji)定數(shu)(shu)(shu)目(mu)(mu)(mu)氯化(hua)(hua)金(jin)(jin)的(de)(de)(de)(de)溶液(ye)中，形(xing)(xing)(xing)成(cheng)的(de)(de)(de)(de)核(he)化(hua)(hua)位點的(de)(de)(de)(de)數(shu)(shu)(shu)目(mu)(mu)(mu)越多，最(zui)(zui)(zui)終形(xing)(xing)(xing)成(cheng)的(de)(de)(de)(de)每個金(jin)(jin)顆粒(li)(li)(li)的(de)(de)(de)(de)尺寸就越小(xiao)。因而(er)微粒(li)(li)(li)的(de)(de)(de)(de)大(da)(da)小(xiao)可(ke)(ke)通過(guo)所(suo)(suo)加(jia)入(ru)(ru)的(de)(de)(de)(de)還(huan)原(yuan)劑的(de)(de)(de)(de) 量來精細(xi)調(diao)控。如(ru)果生(sheng)(sheng)產(chan)條件(jian)經過(guo)優化(hua)(hua)，所(suo)(suo)有(you)的(de)(de)(de)(de)核(he)化(hua)(hua)位點都可(ke)(ke)以在瞬間同時發生(sheng)(sheng)，使得所(suo)(suo)形(xing)(xing)(xing)成(cheng)的(de)(de)(de)(de)金(jin)(jin)顆粒(li)(li)(li)大(da)(da)小(xiao)都完全(quan)一(yi)(yi)(yi)(yi)致（即單分散型）。要做到(dao)這(zhe)一(yi)(yi)(yi)(yi)點是很困難的(de)(de)(de)(de)。 大(da)(da)多數(shu)(shu)(shu)的(de)(de)(de)(de)生(sheng)(sheng)產(chan)方法都無法使所(suo)(suo)有(you)金(jin)(jin)離子于(yu)瞬間同時得到(dao)還(huan)原(yuan)并形(xing)(xing)(xing)成(cheng)核(he)化(hua)(hua)位點，從(cong)而(er)造(zao)成(cheng)核(he)化(hua)(hua)過(guo)程的(de)(de)(de)(de)不均(jun)一(yi)(yi)(yi)(yi)及多分散性(xing)膠體的(de)(de)(de)(de)產(chan)生(sheng)(sheng)，最(zui)(zui)(zui)終導致產(chan)品的(de)(de)(de)(de)重復(fu)性(xing)低下、交聯 物不穩定。

圖3 被包繞雙電(dian)子層的膠體金顆粒

每個(ge)膠體金(jin)(jin)(jin)粒(li)周圍(wei)都包繞著來源于溶液(ye)(ye)中(zhong)(zhong)殘留陰離子的(de)負電荷層(ceng)的(de)金(jin)(jin)(jin)顆粒(li)懸液(ye)(ye)構成(cheng)（見圖3），這(zhe)種被稱作zeta電位的(de)電子層(ceng)使得金(jin)(jin)(jin)顆粒(li)之(zhi)間相互排斥并在懸浮液(ye)(ye)中(zhong)(zhong)任(ren)意分布。zeta電位可(ke)以通(tong)過改變周圍(wei)溶液(ye)(ye)中(zhong)(zhong)離子的(de)濃度(du)而被壓縮或(huo)擴張。

高質(zhi)量(liang)的膠體金(jin)和(he)定制加工完好的交聯(lian)物方便用于商業用途(tu)，通(tong)過(guo)從信譽度較好的供應(ying)商購買這些(xie)成分(fen)而(er)非試圖自己加工大批量(liang)的金(jin)不僅(jin)可以節省生(sheng)產廠(chang)家的時間還可以減少他們的制作風險。

好膠(jiao)體金和不好的膠(jiao)體金

膠體金及(ji)交聯物的(de)(de)(de)生產(chan)制造表(biao)面看似簡易(yi)，若掉以輕(qing)心則(ze)可導致生產(chan)出劣(lie)質、性(xing)能(neng)(neng)(neng)差及(ji)重(zhong)現性(xing)極(ji)差的(de)(de)(de)產(chan)品(pin)進而影響(xiang)其商業用(yong)途。將這樣的(de)(de)(de)產(chan)品(pin)應用(yong)于快速檢測(ce) 中可能(neng)(neng)(neng)導致結(jie)(jie)果(guo)(guo)的(de)(de)(de)低穩(wen)定性(xing)、低敏感性(xing)及(ji)低特異性(xing)。為防止這樣的(de)(de)(de)結(jie)(jie)果(guo)(guo)出現，應使用(yong)透射(she)電(dian)子顯(xian)微鏡（TEM）來評價(jia)膠體金的(de)(de)(de)超細微結(jie)(jie)構。這種檢測(ce)能(neng)(neng)(neng)使生產(chan)者(zhe)對 照標準(zhun)比較(jiao)膠體的(de)(de)(de)直徑，得到顆粒(li)球狀、顆粒(li)不規則(ze)性(xing)和顆粒(li)直徑的(de)(de)(de)變(bian)化。

圖4 優質膠體(ti)金與劣質（不穩(wen)定(ding)）膠體(ti)金

如果(guo)(guo)還原(yuan)過(guo)(guo)程(cheng)(cheng)中核化(hua)作用及形(xing)(xing)成(cheng)(cheng)(cheng)速度(du)沒有得到很(hen)好控制，粒(li)(li)(li)子(zi)(zi)(zi)的(de)(de)(de)(de)(de)形(xing)(xing)成(cheng)(cheng)(cheng)就會不(bu)均(jun)一。（見(jian)圖(tu)４），所見(jian)的(de)(de)(de)(de)(de)粒(li)(li)(li)子(zi)(zi)(zi)可能具有不(bu)同的(de)(de)(de)(de)(de)大小(xiao)及形(xing)(xing)狀（如橢圓形(xing)(xing)、三角形(xing)(xing)、 長方形(xing)(xing)、菱(ling)形(xing)(xing)等等）。這樣的(de)(de)(de)(de)(de)粒(li)(li)(li)子(zi)(zi)(zi)在(zai)與(yu)蛋(dan)白(bai)的(de)(de)(de)(de)(de)結合過(guo)(guo)程(cheng)(cheng)中將無法被(bei)均(jun)勻包(bao)被(bei)，也不(bu)能在(zai)溶(rong)液(ye)中均(jun)勻分(fen)布。最終將影響產品的(de)(de)(de)(de)(de)顏(yan)色(se)(se)(se)、敏感性(xing)、特異性(xing)及穩定性(xing)。僅僅 5%形(xing)(xing)狀不(bu)均(jun)一的(de)(de)(de)(de)(de)粒(li)(li)(li)子(zi)(zi)(zi)都會影響測試的(de)(de)(de)(de)(de)結果(guo)(guo)，使其完全不(bu)具重現(xian)性(xing)。與(yu)代表著制作精(jing)良的(de)(de)(de)(de)(de)40nm的(de)(de)(de)(de)(de)單(dan)分(fen)散性(xing)膠(jiao)體粒(li)(li)(li)子(zi)(zi)(zi)的(de)(de)(de)(de)(de)櫻桃紅色(se)(se)(se)相比，由(you)“劣(lie)質金”所形(xing)(xing)成(cheng)(cheng)(cheng)的(de)(de)(de)(de)(de)信號 常可見(jian)到淡(dan)藍色(se)(se)(se)或紫色(se)(se)(se)。雖(sui)然在(zai)檢測系(xi)統中白(bai)色(se)(se)(se)背景(jing)膜上較暗的(de)(de)(de)(de)(de)顏(yan)色(se)(se)(se)更容(rong)易辨別，但(dan)暗示(shi)著潛在(zai)的(de)(de)(de)(de)(de)不(bu)穩定性(xing)，而這種不(bu)穩定性(xing)更容(rong)易造成(cheng)(cheng)(cheng)錯誤的(de)(de)(de)(de)(de)結果(guo)(guo)。更嚴重的(de)(de)(de)(de)(de)是(shi)， 粒(li)(li)(li)子(zi)(zi)(zi)形(xing)(xing)狀及尺(chi)寸的(de)(de)(de)(de)(de)不(bu)均(jun)一會導(dao)致蛋(dan)白(bai)包(bao)被(bei)的(de)(de)(de)(de)(de)不(bu)均(jun)一，這樣會導(dao)致交聯(lian)物(wu)長時(shi)(shi)間(jian)的(de)(de)(de)(de)(de)積聚與(yu)凝集，儲存于溶(rong)液(ye)中的(de)(de)(de)(de)(de)交聯(lian)物(wu)可能于幾天甚至(zhi)幾個小(xiao)時(shi)(shi)內就出現(xian)這樣的(de)(de)(de)(de)(de)變化(hua)。

即使立即將交聯物干燥于固相基質上(shang)也無法完全克服這個問題，在干燥過程中，由于粒(li)子形狀而未穩(wen)定結合的表面蛋(dan)白很(hen)容易分離，造成假陽性(xing)及高背景。

快(kuai)速(su)檢測操(cao)作過程中一個最常(chang)(chang)見(jian)的(de)問(wen)題(ti)(ti)就是(shi)金(jin)(jin)交聯物(wu)不能以適當的(de)速(su)度(du)及(ji)完(wan)(wan)整形(xing)式從(cong)玻(bo)璃(li)纖維(wei)(wei)結(jie)合墊上釋放，這(zhe)個問(wen)題(ti)(ti)常(chang)(chang)常(chang)(chang)是(shi)因(yin)為未(wei)完(wan)(wan)全包被(bei)的(de)金(jin)(jin)顆粒直接暴 露在玻(bo)璃(li)纖維(wei)(wei)材料(liao)上而不能釋放。這(zhe)必然意味著(zhu)表面蛋白或(huo)者永久地附(fu)著(zhu)在纖維(wei)(wei)基質上或(huo)離開金(jin)(jin)顆粒自(zi)由(you)飄浮。開始就具(ju)備(bei)包被(bei)均一的(de)單分散(san)性球(qiu)形(xing)粒子再加(jia)上制備(bei) 完(wan)(wan)好的(de)金(jin)(jin)交聯物(wu)，可(ke)大大減少這(zhe)種(zhong)危險問(wen)題(ti)(ti)的(de)發生。

盡管(guan)TEM檢測是決定膠體(ti)質量(liang)的(de)(de)(de)唯一正確方法，但鑒定膠體(ti)或交(jiao)聯(lian)(lian)物(wu)是否(fou)包(bao)含融合的(de)(de)(de)、凝(ning)集的(de)(de)(de)或者不(bu)均一粒子亦或含有不(bu)同大小粒子群(qun)體(ti)的(de)(de)(de)快速方法就是目 測它的(de)(de)(de)顏色。優質的(de)(de)(de)40nm（診斷(duan)應(ying)用中最常使(shi)用的(de)(de)(de)粒子大小）的(de)(de)(de)膠體(ti)應(ying)該顯(xian)示櫻桃(tao)紅(hong)色。如果膠體(ti)或交(jiao)聯(lian)(lian)物(wu)出現紫色，很有可能說明其質量(liang)低劣且不(bu)穩定。

金顆粒大小的(de)選擇(ze)

圖5：因(yin)優化信(xin)號選擇金粒子的大(da)小

檢測信(xin)號是由金顆(ke)粒(li)聚(ju)集(ji)(ji)于(yu)測試線(xian)或控制線(xian)而(er)出(chu)現的(de)(de)信(xin)號。這些(xie)(xie)粒(li)子(zi)(zi)(zi)必須(xu)足夠大(da)(da)到能(neng)被看見(jian)(jian)，粒(li)子(zi)(zi)(zi)的(de)(de)尺寸(cun)越(yue)(yue)大(da)(da)，這些(xie)(xie)粒(li)子(zi)(zi)(zi)聚(ju)集(ji)(ji)后就越(yue)(yue)容易被看見(jian)(jian)。例如(ru)1nm 直徑的(de)(de)粒(li)子(zi)(zi)(zi)，無論其聚(ju)集(ji)(ji)數(shu)量(liang)多少幾乎都是不可能(neng)被看見(jian)(jian)的(de)(de)，因為(wei)1nm的(de)(de)粒(li)子(zi)(zi)(zi)沒有更大(da)(da)粒(li)子(zi)(zi)(zi)所具有的(de)(de)亮紅色。只有直徑達到20nm的(de)(de)粒(li)子(zi)(zi)(zi)才會(hui)出(chu)現可見(jian)(jian)的(de)(de)信(xin)號。 隨著粒(li)子(zi)(zi)(zi)尺寸(cun)的(de)(de)增(zeng)大(da)(da)，位阻(zu)現象(xiang)又成了一個問題（見(jian)(jian)圖(tu)5）。例如(ru)，如(ru)果(guo)IgG（160，000道(dao)爾(er)頓(dun)）分子(zi)(zi)(zi)僅(jin)僅(jin)8nm長，大(da)(da)約4nm從金顆(ke)粒(li)表(biao)(biao)面伸展開，那 么，100nm的(de)(de)粒(li)子(zi)(zi)(zi)將會(hui)使這些(xie)(xie)小(xiao)的(de)(de)表(biao)(biao)面分子(zi)(zi)(zi)顯得(de)更小(xiao)而(er)很難與(yu)特異性的(de)(de)蛋白(bai)相互作用。此外，這些(xie)(xie)粒(li)子(zi)(zi)(zi)的(de)(de)尺寸(cun)越(yue)(yue)大(da)(da)，它們在既定體積溶(rong)液中存在的(de)(de)數(shu)量(liang)越(yue)(yue)小(xiao)。

這種可見度的(de)(de)(de)需要與位阻現象之(zhi)間(jian)的(de)(de)(de)矛盾(dun)現象表明，對于大多數的(de)(de)(de)免疫檢(jian)測應(ying)用而言，最適的(de)(de)(de)粒子大小是40nm.在(zai)某些情況下當(dang)(dang)位阻現象成為(wei)較(jiao)(jiao)大問題時 （如針對較(jiao)(jiao)小的(de)(de)(de)抗(kang)原(yuan)），20nm的(de)(de)(de)粒子則更(geng)為(wei)合適；當(dang)(dang)希望出(chu)現更(geng)深顏色或當(dang)(dang)分子表面(mian)較(jiao)(jiao)低的(de)(de)(de)曲率提高(gao)了(le)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體分子間(jian)的(de)(de)(de)交互作用，較(jiao)(jiao)大一點的(de)(de)(de)粒子則更(geng)為(wei)可 取。應(ying)該由實(shi)驗決定(ding)確定(ding)多少顆粒大小能(neng)帶來高(gao)靈(ling)敏度、淺背(bei)景色和(he)高(gao)穩定(ding)性。

膠體(ti)金的制造(zao)

制造者必須了(le)(le)解讓他們的(de)(de)(de)蛋白與膠體(ti)金持久結合的(de)(de)(de)物(wu)理及化學進(jin)程，具備(bei)了(le)(le)這些知(zhi)識之后(hou)，要進(jin)行從小(xiao)批量(liang)制造到大(da)規模生產(chan)就(jiu)變得(de)輕而(er)易舉，而(er)無須以犧牲 產(chan)品(pin)(pin)的(de)(de)(de)敏感性(xing)(xing)(xing)(xing)、穩定(ding)性(xing)(xing)(xing)(xing)、特異(yi)性(xing)(xing)(xing)(xing)或重現性(xing)(xing)(xing)(xing)為(wei)代價(jia)了(le)(le)。僅僅把交(jiao)聯(lian)物(wu)揉合到一(yi)起，雖(sui)然成本低廉且簡易，卻通常(chang)(chang)會(hui)導致聚集(ji)體(ti)的(de)(de)(de)形成。通過TEM可(ke)以觀察(cha)到，每一(yi)個 聚集(ji)體(ti)都是由4個或更(geng)多金交(jiao)聯(lian)物(wu)分子組成的(de)(de)(de)群體(ti)。這種聚集(ji)體(ti)的(de)(de)(de)存在通常(chang)(chang)預示著產(chan)品(pin)(pin)的(de)(de)(de)不(bu)穩定(ding)性(xing)(xing)(xing)(xing)，其性(xing)(xing)(xing)(xing)能(neng)會(hui)隨著時間(jian)而(er)改變。雖(sui)然比較未聚集(ji)的(de)(de)(de)產(chan)品(pin)(pin)剛(gang)開始具有更(geng) 高的(de)(de)(de)靈敏度(du)，但這些產(chan)品(pin)(pin)很快(kuai)會(hui)出現穩定(ding)性(xing)(xing)(xing)(xing)和特異(yi)性(xing)(xing)(xing)(xing)的(de)(de)(de)問題(ti)。

一種好的交(jiao)(jiao)聯物表(biao)(biao)現(xian)為(wei)蛋白吸(xi)附于(yu)金的表(biao)(biao)面上，與膠乳不同的是(shi)，蛋白是(shi)被動地吸(xi)附于(yu)交(jiao)(jiao)聯物表(biao)(biao)面，因(yin)而(er)不會(hui)出(chu)現(xian)共價(jia)結(jie)合。然而(er)，由(you)于(yu)某些小分(fen)子(zi)(zi)(zi)與金表(biao)(biao)面 沒有足夠的結(jie)合位(wei)(wei)點；像(xiang)激素、藥物及其他小分(fen)子(zi)(zi)(zi)（<10KD）在被動交(jiao)(jiao)聯之前(qian)必須先(xian)結(jie)合到大分(fen)子(zi)(zi)(zi)載體(ti)上，多為(wei)BSA.在任何情(qing)況下，位(wei)(wei)阻現(xian)象(xiang)都會(hui)阻 礙(ai)小分(fen)子(zi)(zi)(zi)升至zeta電位(wei)(wei)。載體(ti)應該(gai)是(shi)惰性(xing)的，這樣就不會(hui)影響檢測(ce)蛋白質的活性(xing)。

抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)Fc片(pian)段(duan)緊(jin)緊(jin)吸附在(zai)(zai)金(jin)(jin)顆粒表(biao)面(mian)上，這樣圍繞著金(jin)(jin)顆粒的(de)(de)(de)雙電子(zi)層表(biao)面(mian)的(de)(de)(de)Fab片(pian)段(duan)就突出在(zai)(zai)外面(mian)，這樣Fab就能吸附分析(xi)物(wu)（見(jian)圖(tu)6）。膠(jiao)體(ti)(ti)(ti)(ti)金(jin)(jin)上 標(biao)記抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)時，不能有過量(liang)(liang)的(de)(de)(de)待標(biao)記抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)存在(zai)(zai)。因為(wei)過量(liang)(liang)的(de)(de)(de)游離(li)的(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)會(hui)跟(gen)膠(jiao)體(ti)(ti)(ti)(ti)金(jin)(jin)上的(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)與抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原發生競(jing)爭反應，導致出現(xian)假陰性(xing)，而且過量(liang)(liang)的(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)蛋(dan)白會(hui)影響到標(biao)記 物(wu)的(de)(de)(de)穩定性(xing)。蛋(dan)白質和膠(jiao)體(ti)(ti)(ti)(ti)金(jin)(jin)結合的(de)(de)(de)最(zui)佳條件在(zai)(zai)蛋(dan)白質的(de)(de)(de)等電點附近。

蛋白通過以(yi)下機制于幾秒之內吸附(fu)于金表面(mian)：

圖(tu)6 抗體與(yu)金(jin)粒子的結合(he)力

(1)?金粒子(zi)所帶負電(dian)(dian)荷與(yu)蛋(dan)白(bai)內氨基酸（如賴氨酸）所帶陽性電(dian)(dian)荷的(de)最(zui)初的(de)相互吸引

(2)蛋白通過某些氨基(ji)酸(suan)殘基(ji)包(bao)括色氨酸(suan)與金粒子表面之間的疏(shu)水吸附作用

(3)蛋白(bai)中的(de)(de)半(ban)胱氨酸的(de)(de)硫基與金粒子(zi)間的(de)(de)配價結合(he)

交聯物的穩定(ding)

隨著特(te)異蛋(dan)白(bai)的(de)(de)結合(he)，交聯(lian)物必須用(yong)適當的(de)(de)試劑進行穩(wen)定(ding)，通常使用(yong)BSA、明(ming)膠、PEG（聚乙二醇）或(huo)酪蛋(dan)白(bai)。使用(yong)穩(wen)定(ding)劑有雙重功(gong)能，一(yi)是(shi)(shi)它(ta)可通過封閉膠體(ti)表面未和特(te)異性(xing)蛋(dan)白(bai)結合(he)的(de)(de)位點(dian)而減少(shao)了非特(te)異性(xing)反應；二是(shi)(shi)它(ta)可有助于更穩(wen)定(ding)的(de)(de)懸液的(de)(de)形(xing)成。

一旦(dan)結合，金即被調(diao)整至預期的(de)(de)(de)濃度(du)，并混懸于相應(ying)的(de)(de)(de)緩(huan)(huan)沖(chong)(chong)(chong)(chong)液(ye)中。這種(zhong)緩(huan)(huan)沖(chong)(chong)(chong)(chong)液(ye)應(ying)可(ke)使(shi)液(ye)體交聯(lian)(lian)物穩(wen)定，商業生產(chan)者(zhe)常(chang)(chang)會使(shi)用低摩爾濃度(du)緩(huan)(huan)沖(chong)(chong)(chong)(chong)液(ye)以使(shi)得工業客戶 能簡單重懸交聯(lian)(lian)物于自己所選的(de)(de)(de)緩(huan)(huan)沖(chong)(chong)(chong)(chong)液(ye)中。總的(de)(de)(de)來說，最終(zhong)的(de)(de)(de)儲存(cun)緩(huan)(huan)沖(chong)(chong)(chong)(chong)液(ye)不應(ying)含(han)有高鹽緩(huan)(huan)沖(chong)(chong)(chong)(chong)液(ye)和(he)表面活性劑，因為(wei)它們有可(ke)能通過(guo)水解或(huo)置換抗體造成損(sun)傷(shang)。含(han)有硫 基(ji)或(huo)汞的(de)(de)(de)防(fang)(fang)腐(fu)劑會造成交聯(lian)(lian)物的(de)(de)(de)完全(quan)毀壞。膠體金最常(chang)(chang)用的(de)(de)(de)防(fang)(fang)腐(fu)劑為(wei)0.1%疊氮化合物。

專業制作出的(de)膠體金的(de)儲(chu)(chu)藏幾(ji)乎是無限期的(de)。通過計算有(you)多少(shao)結合劑(ji)可(ke)(ke)吸(xi)附到金粒子(zi)的(de)表面，可(ke)(ke)能會減少(shao)批間差，其形成的(de)交(jiao)聯物比單獨的(de)抗體可(ke)(ke)更長久(jiu)的(de)儲(chu)(chu)存(cun)；恰當干燥(zao)于(yu)固相組分(fen)的(de)金標蛋白則可(ke)(ke)保存(cun)數(shu)年之久(jiu)。

膠體金的大(da)規模制(zhi)造

盡管已(yi)經有技(ji)術(shu)及(ji)科學的(de)資料來(lai)描述出簡單(dan)的(de)小量膠體金和(he)交聯物的(de)生產(chan)(chan)過程(cheng)，但(dan)應用(yong)于(yu)(yu)大批量商業生產(chan)(chan)（譬如100升的(de)量）時的(de)方法(fa)仍舊存在(zai)著所有權的(de) 問題。假(jia)設(she)從氯金酸至膠體金的(de)還原(yuan)過程(cheng)必須于(yu)(yu)微(wei)秒之內完成，那么(me)100升或更(geng)大量產(chan)(chan)品的(de)生產(chan)(chan)則需要非常(chang)精細的(de)技(ji)術(shu)而不是(shi)僅僅遵(zun)循著小量產(chan)(chan)品生產(chan)(chan)的(de)同一原(yuan) 則。

由于(yu)這些技(ji)術僅僅為用于(yu)商(shang)業生(sheng)(sheng)(sheng)產(chan)的金交聯物企業中的專(zhuan)家所(suo)熟知(zhi)，所(suo)以大多數生(sheng)(sheng)(sheng)產(chan)者不會試(shi)圖在企業內(nei)部選擇這種艱(jian)巨的任務(wu)生(sheng)(sheng)(sheng)產(chan)大批量的膠(jiao)體金。相反，快速檢測試(shi)劑的生(sheng)(sheng)(sheng)產(chan)商(shang)會與膠(jiao)體金專(zhuan)家合作，籍此(ci)來減少費用的成(cheng)本和失敗的危險，同時也可以使(shi)得他們的產(chan)品盡(jin)快走向(xiang)市場。

這樣的(de)(de)(de)合(he)作安(an)排通常由生產商進(jin)(jin)行(xing)內部(bu)的(de)(de)(de)實(shi)(shi)驗(yan)(yan)開始，這些(xie)實(shi)(shi)驗(yan)(yan)使用小量商業用途的(de)(de)(de)膠體來(lai)決(jue)定(ding)何種抗體最適于其應(ying)用。隨后，一些(xie)企業內部(bu)進(jin)(jin)行(xing)更大(da)量的(de)(de)(de)膠體 交聯實(shi)(shi)驗(yan)(yan)來(lai)決(jue)定(ding)按比例放大(da)10倍或(huo)100倍的(de)(de)(de)產品是(shi)否能生產出(chu)相同質(zhi)量的(de)(de)(de)交聯物。在提高溫度和應(ying)用不(bu)同緩沖(chong)液以及干(gan)燥狀態下進(jin)(jin)行(xing)此(ci)階段的(de)(de)(de)嚴格的(de)(de)(de)金交聯物穩 定(ding)性(xing)(xing)實(shi)(shi)驗(yan)(yan)操作是(shi)尤(you)其重(zhong)要的(de)(de)(de)。質(zhi)量控制(zhi)應(ying)包括使用TEM檢(jian)查有(you)關(guan)聚集(ji)產生的(de)(de)(de)情況、光密度、敏感性(xing)(xing)及特異性(xing)(xing)。在進(jin)(jin)行(xing)大(da)批量快(kuai)速檢(jian)測產品的(de)(de)(de)生產之前，多批次地進(jin)(jin) 行(xing)這種大(da)量的(de)(de)(de)實(shi)(shi)驗(yan)(yan)來(lai)決(jue)定(ding)生產的(de)(de)(de)重(zhong)現性(xing)(xing)是(shi)很有(you)必要的(de)(de)(de)。

定量的(de)可能性

大多數的快速檢測(ce)只(zhi)(zhi)是(shi)定性的，只(zhi)(zhi)能用于檢測(ce)臨床樣本中是(shi)否含有(you)超過檢測(ce)濃度的特定生物成(cheng)分存(cun)在。然而，有(you)許多的檢測(ce)則需要一種定量的元素，例如監(jian)控臨床指標的變化或(huo)確定特定分析物的相對或(huo)絕對濃度。

這(zhe)樣(yang)的(de)(de)檢測(ce)包括三種(zhong)(zhong)形(xing)(xing)式，第一種(zhong)(zhong)形(xing)(xing)式是，當(dang)進(jin)行測(ce)試時，許多內在(zai)(zai)的(de)(de)信(xin)號可出(chu)現測(ce)試結(jie)果在(zai)(zai)視覺上的(de)(de)對比，這(zhe)種(zhong)(zhong)測(ce)試僅(jin)僅(jin)能提供半定量的(de)(de)結(jie)果，結(jie)果可分(fen)(fen)為(wei) 陰性、弱陽(yang)性、中陽(yang)性和強陽(yang)性。第二種(zhong)(zhong)類型，檢測(ce)線的(de)(de)反應劑設計成只能結(jie)合已知(zhi)一定量的(de)(de)分(fen)(fen)析物(wu)，任何過(guo)量的(de)(de)分(fen)(fen)析物(wu)將會和下(xia)一條(tiao)(tiao)檢測(ce)線結(jie)合，產生一個溫度(du)計 式的(de)(de)條(tiao)(tiao)帶梯度(du)。

在第三種(zhong)測(ce)試(shi)(shi)類型(xing)中，測(ce)試(shi)(shi)樣(yang)品所產生的(de)信號由一(yi)個(ge)小型(xing)的(de)、便攜(xie)式的(de)分析儀(yi)讀取，并由分析儀(yi)將(jiang)有色的(de)測(ce)試(shi)(shi)線轉(zhuan)換為數字信號，許多這樣(yang)一(yi)般的(de)條(tiao)帶測(ce)試(shi)(shi)讀取儀(yi)將(jiang)于近期(qi)應用于商業用途。

金標(biao)(biao)記(ji)尤其適合于這(zhe)種定量或(huo)半定量的(de)測(ce)試，因為測(ce)試產(chan)(chan)生(sheng)(sheng)的(de)信號(hao)既精(jing)確(que)(que)又具(ju)有高度(du)可(ke)重復性(xing)。大多數的(de)信號(hao)是利用光電二極管(guan)通過反射(she)標(biao)(biao)定的(de)刻度(du)尺(chi)產(chan)(chan)生(sheng)(sheng)數 字，精(jing)確(que)(que)度(du)取(qu)決(jue)于可(ke)被讀取(qu)得測(ce)試結果的(de)準確(que)(que)程(cheng)度(du)以(yi)及測(ce)試條(tiao)帶(dai)產(chan)(chan)生(sheng)(sheng)的(de)可(ke)重現性(xing)信號(hao)的(de)可(ke)靠程(cheng)度(du)。由于金標(biao)(biao)記(ji)的(de)精(jing)確(que)(que)度(du)，相對于許(xu)多其他類(lei)型的(de)標(biao)(biao)記(ji)，其可(ke)產(chan)(chan)生(sheng)(sheng)的(de)可(ke) 重現性(xing)信號(hao)具(ju)備更高的(de)可(ke)靠性(xing)。

金標信號的銀增(zeng)強作用

無論以層(ceng)析(xi)還是滲(shen)濾模(mo)的(de)形式，快速檢測法(fa)通(tong)常都(dou)可提供與ELISA 試劑盒相似或更高(gao)的(de)敏感性。對大多(duo)(duo)數的(de)待(dai)分(fen)析(xi)物(wu)而言，檢測水平達到1ng/ml或更小的(de)量(liang)是可能的(de)。然而，也有許多(duo)(duo)待(dai)分(fen)析(xi)物(wu)對這種直接標記系統無法(fa)達到足夠的(de)敏感度。

要用(yong)(yong)(yong)肉(rou)眼在(zai)清(qing)晰背景的(de)白色膜條上發(fa)現(xian)金產生的(de)信號(hao)，其(qi)敏感(gan)度(du)則(ze)要受到(dao)(dao)使(shi)用(yong)(yong)(yong)者能力的(de)局限。使(shi)用(yong)(yong)(yong)光反射技(ji)術的(de)定量方(fang)法(fa)(fa)常(chang)常(chang)無法(fa)(fa)達(da)到(dao)(dao)人類(lei)肉(rou)眼視覺更(geng)大的(de)敏 感(gan)性(xing)。使(shi)用(yong)(yong)(yong)銀(yin)來增(zeng)(zeng)強(qiang)金標記強(qiang)度(du)是一種(zhong)有(you)價值和前途的(de)技(ji)術，它可(ke)獲得增(zeng)(zeng)加100倍的(de)檢測(ce)(ce)敏感(gan)性(xing)。用(yong)(yong)(yong)這(zhe)種(zhong)方(fang)法(fa)(fa)將銀(yin)溶液(ye)應(ying)用(yong)(yong)(yong)到(dao)(dao)測(ce)(ce)試線(xian)，來源于金標記的(de)初(chu)期信號(hao) （有(you)時(shi)候是肉(rou)眼可(ke)見(jian)的(de)）即可(ke)被(bei)增(zeng)(zeng)強(qiang)。在(zai)應(ying)用(yong)(yong)(yong)較小粒(li)子（約5nm）的(de)金交聯(lian)物的(de)位置(zhi)，使(shi)用(yong)(yong)(yong)這(zhe)種(zhong)間(jian)接方(fang)法(fa)(fa)可(ke)獲得更(geng)大的(de)總體敏感(gan)性(xing)。通過在(zai)一步測(ce)(ce)試法(fa)(fa)中摻入(ru)銀(yin)試 劑(ji)就有(you)可(ke)能無需任何其(qi)它步驟(zou)就使(shi)信號(hao)得到(dao)(dao)增(zeng)(zeng)強(qiang)，這(zhe)樣(yang)液(ye)體樣(yang)品的(de)應(ying)用(yong)(yong)(yong)便能推進整個(ge)反應(ying)的(de)進程（見(jian)圖7）。所有(you)的(de)反應(ying)物（包括金交聯(lian)物及增(zeng)(zeng)強(qiang)劑(ji)銀(yin)鹽）都被(bei)干燥(zao) 于測(ce)(ce)試條帶上僅由(you)樣(yang)品溶開。

圖(tu)7層析快速檢測中(zhong)銀對金標

這種間接的增(zeng)強技術有(you)望在pg/ml的范(fan)圍(wei)內(nei)對待(dai)分(fen)析物進行(xing)檢(jian)測(ce)。被干燥后的反應(ying)物是穩定的并有(you)可(ke)能(neng)在聚集(ji)之前被引入測(ce)試(shi)裝置中(zhong)。由(you)于敏感性的增(zeng) 強，比目(mu)前用(yong)于直接標(biao)記的測(ce)試(shi)系統中(zhong)更(geng)小量(liang)的樣品也可(ke)被檢(jian)測(ce)出(chu)(chu)。鑒于銀的增(zeng)強效果(guo)，使得(de)為(wei)從(cong)前的交聯檢(jian)測(ce)法無法檢(jian)測(ce)出(chu)(chu)的待(dai)分(fen)析物而(er)研(yan)究開(kai)發出(chu)(chu)基于金的一步 檢(jian)測(ce)法成為(wei)可(ke)能(neng)。

附言：

快速測試(shi)要求

基于(yu)膜上的快速(su)(su)檢測(ce)(ce)法可廣泛的應用(yong)于(yu)臨床(chuang)。雖然在臨床(chuang)環境中大多(duo)(duo)數檢測(ce)(ce)是由專業的醫療保健(jian)人士操(cao)作，但越(yue)來越(yue)多(duo)(duo)的檢測(ce)(ce)方法被批(pi)準(zhun)由相對無經驗(yan)的家(jia)庭 使用(yong)者操(cao)作使用(yong)。為創造可成(cheng)功應用(yong)于(yu)這個特殊市(shi)場(chang)的快速(su)(su)檢測(ce)(ce)法，生產商(shang)必(bi)須(xu)為這些有或無經驗(yan)的使用(yong)者周全(quan)考慮。除此之外，生產商(shang)為了(le)獲(huo)得加工處理的效率而 控(kong)制(zhi)成(cheng)本必(bi)須(xu)有自己的一套需求。以下是目前快速(su)(su)檢測(ce)(ce)產生的關(guan)鍵要求。

操(cao)(cao)作簡(jian)(jian)易(yi)(yi)(yi) 或(huo)許操(cao)(cao)作上(shang)的(de)(de)簡(jian)(jian)易(yi)(yi)(yi)是(shi)使得快(kuai)速(su)檢測在(zai)商業上(shang)可行的(de)(de)最重要(yao)特(te)色(se)。一般(ban)而(er)言(yan)，這種檢測都是(shi)應(ying)用多(duo)功能(neng)且簡(jian)(jian)單的(de)(de)生化技術(shu)而(er)無(wu)需或(huo)僅需極小的(de)(de)操(cao)(cao)作經驗(yan)即可完成的(de)(de)。面向使用者、提高操(cao)(cao)作性簡(jian)(jian)易(yi)(yi)(yi)性的(de)(de)特(te)色(se)包括(kuo)一步操(cao)(cao)作法(fa)及測試結果易(yi)(yi)(yi)識(shi)別的(de)(de)特(te)色(se)。

樣品(pin)(pin)量小 臨(lin)床醫生和家庭使用者(zhe)都鐘(zhong)愛測試中僅需極少(shao)量樣品(pin)(pin)這一點，此特色(se)具(ju)有眾多優點：收集(ji)樣品(pin)(pin)時無需較多經驗，通常(chang)操作速度較快(kuai)，給患者(zhe)造成的(de)潛在傷害及疼痛也會較少(shao)，同時還能減少(shao)浪費(fei)。

快速(su) 快速(su)檢測正因這(zhe)一點而(er)得名(ming)。在(zai)許多臨床(chuang)檢測應用中會(hui)使用到(dao)快速(su)檢測，速(su)度是(shi)其根本。根據臨床(chuang)醫(yi)生(sheng)需求，這(zhe)種檢測的理(li)想目標就(jiu)是(shi)在(zai)3分鐘內提供結果，而(er)許多快速(su)檢測都可滿足(zu)這(zhe)種要求。

靈活 對大多數的檢測而言(yan)，若要滿足臨床醫生需要即時出結果就可能要以(yi)犧牲檢測結果的質量為代價。對生產商而言(yan)，應為快速檢測選擇那些可獲得(de)定(ding)性、半定(ding)量、或者(zhe)定(ding)量結果而無(wu)需大幅置換基底物或反應物的理想的原材料。

臨(lin)床應(ying)用 要(yao)使得快速(su)檢(jian)(jian)(jian)能在臨(lin)床環境中得到廣泛應(ying)用，它取得的(de)(de)結果必須可與臨(lin)床實驗室(shi)儀器檢(jian)(jian)(jian)測(ce)所提供的(de)(de)相媲美。快速(su)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)的(de)(de)理想特征包(bao)括高(gao)敏感性(xing)（<%的(de)(de)假(jia)陰(yin) 性(xing)）、高(gao)特異性(xing)（<%的(de)(de)假(jia)陽性(xing)）及長期穩(wen)(wen)定(ding)性(xing)（12個月以上），結合(he)良好(hao)的(de)(de)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)設(she)計，既有(you)助于減(jian)少金交聯(lian)物(wu)的(de)(de)應(ying)用時產生的(de)(de)假(jia)陽性(xing)和假(jia)陰(yin)性(xing)，又能增(zeng)加 測(ce)試（交聯(lian)物(wu)）的(de)(de)長期穩(wen)(wen)定(ding)性(xing)，商業用途的(de)(de)金交聯(lian)物(wu)可達(da)(da)到長達(da)(da)１２個月的(de)(de)穩(wen)(wen)定(ding)性(xing)。

可(ke)(ke)靠(kao)性 快速(su)檢測(ce)(ce)的(de)發展造就了(le)大量多樣化的(de)測(ce)(ce)試(shi)片或試(shi)劑盒(he)式(shi)檢測(ce)(ce)模式(shi)的(de)產(chan)生(sheng)，適用(yong)的(de)環境(jing)范(fan)圍(wei)從緊(jin)急車(che)輛到(dao)家庭環境(jing)不等。快速(su)檢測(ce)(ce)除了(le)對物理條件不能(neng)(neng)苛刻外，更(geng)要求 其能(neng)(neng)提(ti)供變(bian)異系數(shu)在5%或更(geng)小(xiao)范(fan)圍(wei)內的(de)可(ke)(ke)靠(kao)結果。若嚴格地控制生(sheng)產(chan)條件，金交聯物將有(you)助于(yu)通過最小(xiao)化批量生(sheng)產(chan)中的(de)變(bian)異提(ti)升測(ce)(ce)試(shi)的(de)可(ke)(ke)靠(kao)性。

低廉 欲(yu)用于臨(lin)床檢(jian)測(ce)的快(kuai)速檢(jian)測(ce)遭(zao)到(dao)同臨(lin)床實驗室檢(jian)測(ce)一(yi)樣全面(mian)降價(jia)的定(ding)價(jia)壓(ya)力；欲(yu)用于家(jia)(jia)庭(ting)使用的快(kuai)速檢(jian)測(ce)又遭(zao)到(dao)同其他廠商相同產品的價(jia)格競爭；面(mian)對(dui)這兩種情(qing)形(xing)，廠家(jia)(jia)必須面(mian)對(dui)每(mei)種測(ce)試結果(guo)都(dou)達到(dao)低成(cheng)本的市場需求。

高附(fu)加值 為(wei)了能在以低價(jia)出(chu)售的一次性快速檢測(ce)中獲利，生(sheng)產(chan)商必須不(bu)斷生(sheng)產(chan)以降低產(chan)品成(cheng)本(ben)。理想的測(ce)試(shi)(shi)應使(shi)用易獲取(qu)的高質(zhi)量(liang)(liang)的原(yuan)材料，部(bu)件易于(yu)大量(liang)(liang)組裝，這(zhe)樣(yang)才能達到原(yuan)料及勞動力成(cheng)本(ben)均低廉。要(yao)取(qu)得這(zhe)種平衡，原(yuan)料和試(shi)(shi)劑則適(shi)于(yu)使(shi)用比手工操作優勢大得多的自動加工處理。

商(shang)業接(jie)(jie)受度 無(wu)論是(shi)由臨(lin)床中(zhong)受過訓練的專(zhuan)業醫療人士還(huan)是(shi)毫無(wu)經驗的家庭使用(yong)者(zhe)使用(yong)，快速檢測的設計必(bi)須關注(zhu)消費者(zhe)的可接(jie)(jie)受度。相比令操(cao)作(zuo)者(zhe)毫不費力操(cao)作(zuo)的產(chan)品，令人棘手(shou)的儲存(cun)及(ji)操(cao)作(zuo)形式、難(nan)以識別的顏色都是(shi)產(chan)品難(nan)在商(shang)業上(shang)取得(de)成(cheng)功的弊端。

結(jie)語

當乳膠普(pu)遍用于結合物(wu)時，快(kuai)速檢(jian)測從20世紀80年(nian)代中期(qi)開始沒有太大的變化。但自那(nei)以后，由于在(zai)大量(liang)快(kuai)速檢(jian)測法設計(ji)中對更(geng)高敏感(gan)性(xing)(xing)、可靠性(xing)(xing)及重現性(xing)(xing)要求(qiu)的增加使得金作為交聯物(wu)的首(shou)選。

制作(zuo)精良的(de)金(jin)試劑無(wu)論以液體還是(shi)干燥形式存在都具有極大的(de)穩定性。如(ru)果繼續有對基(ji)于(yu)金(jin)的(de)快速檢測有更大敏感性和(he)特(te)異性的(de)需求，唯(wei)有對膠體金(jin)的(de)生產(chan)和(he)使(shi)用進行嚴格的(de)操作(zuo)才有可能取得(de)成功。

參考文獻(xian)

1、 J Chandler, Assay device and method, 96901447.1. European patent application, British Biocell International.

2、John Chandler, PhD, is the managing director, and Tracey Gurmin and Nicola Robinson are part of the custom consultancy team at BBInternational (Cardiff, Wales, UK)

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